基因过表达实验试剂清单与选型指南
一、基本介绍
基因过表达是指将目标基因编码序列克隆到合适的表达载体中，通过转染或病毒感染等方式导入宿主细胞，使该基因在转录水平（mRNA）和/或翻译水平（蛋白）实现高表达。该技术是基因功能研究、信号通路解析、重组蛋白生产及基因治疗等领域的基础实验手段。
完成一次完整的基因过表达实验，通常需要以下关键试剂与耗材：过表达载体质粒、宿主细胞/菌株、转染/转化试剂、筛选抗性、核酸/蛋白检测试剂。淼灵质粒平台提供覆盖哺乳动物细胞、大肠杆菌、酵母、植物等不同系统的过表达现货载体，可满足多样化的实验需求。
二、试剂清单与选型指南
1.过表达载体选择
哺乳动物细胞瞬时过表达—— pCMV系列
适用场景：短期表达（3-7天），无需建立稳定细胞株，适合快速验证基因功能。
推荐产品（淼灵现货）：
• 不带标签：
P72762 pCMV-CHP2(human)-Neo ——适用无标签干扰的下游实验
P73081 pUC57-Dlat(Rat) ——基因模板级质粒
• 带单一标签（方便Western blot检测）：
P72865 pCMV-SEL1L3(human)-3×FLAG-Neo
P74710 pCMV-YME1L1(human)-3×HA-Neo
P73652 pCMV-Sox4(mouse)-3×FLAG-Neo
P73009 pCMV-Egln1(mouse)-3×HA-Neo
• 带荧光标签（可追踪表达定位）：
P72764 pCMV-ABCG2(human)-GFP-Neo
P72635 pCMV-FOXM1(human)-EGFP-Neo
P73006 pCMV-mCherry-TARS2(human)-Neo
• 双标签（蛋白检测双重保障）：
P71966 pCMV-3×FLAG-Wnt10b(mouse)-6×His-Neo
P72763 pCMV-3×FLAG-EEF1B2(pig)-HA-Neo
• 含WPRE增强元件（提高蛋白表达量）：
P73007 pCMV-T7-E2F8(human)-3×FLAG-WPRE-Neo
配套转染试剂建议：淼灵质粒转染时建议使用脂质体转染试剂（如Lipo2000/Lipo3000），或阳离子聚合物转染试剂。
哺乳动物细胞稳定过表达—— pLV3慢病毒系列
适用场景：需要长期稳定表达、难转染细胞（原代细胞、悬浮细胞、干细胞）。
推荐产品（淼灵现货）：
P71406 pLV3-CMV-ELAPOR2(human)-CopGFP-Puro ——荧光+Puro双标记
P72235 pLV3-CMV-3×FLAG-MMP14(human)-EF1a-CopGFP-Puro
P73280 pLV3-CMV-EGFP-PHGDH(human)-3×FLAG-Puro
P73273 pLV3-CMV-EGFP-HSF1(human)-3×FLAG-Puro
P72579 pLV3-CMV-AARS1(human)-3×HA-Neo
P73078 pLV3-CMV-EYFP-ROR1(human)-Puro
P72940 pLV3-CMV-Il7r(mouse)-Puro
慢病毒包装配套试剂建议：淼灵pLV3系列质粒需配合慢病毒包装质粒（psPAX2、pMD2.G）及包装细胞（293T细胞）使用。慢病毒需要注意保存温度，避免多次反复冻融。
原核系统蛋白表达——pT7/pET系列
适用场景：大肠杆菌表达重组蛋白，需要大量纯化蛋白用于体外实验或抗体制备。
推荐产品（淼灵现货）：
P74614 pT7-6×His-TXN(human)——6×His标签，Ni柱纯化
P74615 pT7-BGLAP(human)-GST——GST标签，Glutathione亲和纯化
P74616 pT7-6×His-PDZK1(human)-6×His——双6×His标签
P72877 pTac-GST-ALDH3A2(human)——Tac启动子，IPTG诱导
P71964 pET20b-Ifng(mouse)-HA-rrnBp1-EL222——蓝光诱导表达系统
配套试剂建议：IPTG诱导剂、Ni-NTA琼脂糖珠（His标签纯化）、Glutathione Sepharose（GST标签纯化）、蛋白酶抑制剂、透析/超滤管。
其他系统过表达
| 系统 | 推荐产品（淼灵现货） | 配套试剂 |
| 酵母表达 | P73651 pYEplac195-TEF1-gene-MCS | YPD培养基、酵母转化试剂（LiAc/SS-DNA/PEG） |
| 植物表达 | P41459 pCAMBIA1301-35S-MCS-35S-EGFP-HYg | 农杆菌感受态、侵染液、潮霉素/Kan筛选 |
| 斑马鱼表达 | P71630 | mRNA体外转录试剂盒、显微注射系统 |
| 枯草杆菌表达 | P74712 | 枯草杆菌感受态制备试剂 |
2.筛选抗性选择
| 质粒上标记的筛选基因 | 推荐 | 常用浓度（哺乳细胞） |
| Neo/G418 | G418硫酸盐 | 200-1000 μg/mL |
| Puro | Puromycin二盐酸盐 | 1-10 μg/mL |
| Blast | Blasticidin S | 5-10 μg/mL |
| Hyg | Hygromycin B | 100-500 μg/mL |
| Amp（原核） | Ampicillin | 50-100 μg/mL |
| Kan（原核/植物） | Kanamycin | 50 μg/mL |
参考说明：淼灵pCMV系列多带Neo抗性，pLV3系列多带Puro抗性。建议在使用前通过杀灭曲线确定更佳的筛选浓度。
3.检测试剂
基因过表达成功与否，需要从mRNA和蛋白两个层面验证：
| 检测层面 | 检测方法 | 所需试剂 |
| mRNA水平 | qRT-PCR | Trizol（RNA提取）、反转录试剂盒、SYBR Green qPCR Mix、目标基因和内参引物 |
| 蛋白水平 | Western blot | RIPA裂解液、BCA定量试剂盒、SDS-PAGE试剂、一抗（针对标签或目标蛋白）、HRP标记二抗、ECL显影液 |
| 蛋白水平 | 免疫荧光 | 4%PFA固定液、Triton X-100透膜液、封闭液、荧光标记一抗/二抗、DAPI、抗荧光淬灭封片剂 |
| 蛋白水平 | 流式细胞术 | 胰酶（消化细胞）、PBS、荧光标记抗体 |
若质粒上带有荧光标签（如GFP、CopGFP、EYFP、mCherry），可在转染后24-72h直接在荧光显微镜下观察表达情况，无需额外染色。淼灵带EGFP的产品如P72764、P72635、P73078等可直接用于活细胞成像。
淼灵官网: www.miaolingbio.com
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